混合样本

介绍 

将多个样本合并到一次测序运行中可以显著降低成本。为了实现多路复用，每个样本在扩增过程中都标有唯一的条形码。然后，该条形码将用于在测序后对读数进行解复用。

如何池化

对于 iRepertoire 的arm-PCR 扩增技术，我们提供两种需要合并的产品选项（取决于您的项目规模）。对于小规模项目，我们的iR-Profile 试剂盒包含您扩增和单独对 10 个样本进行条形码编码所需的一切。对于较大规模项目，我们建议购买具有不同条形码的多个iRepertoire Bulk Primer Kits。在这两种情况下，每个样本都会在其自己的反应中被扩增，然后在提交测序之前将样本合并在一起。我们的数据分析软件将根据使用的条形码识别和区分样本。

有关 iRepertoire 产品的更多信息，请参阅我们的产品页面。

举例来说，如果您想使用自己的 Illumina HiSeq 研究 200 个样本的人类 TCR beta 组库，您应该购买 iRepertoire 目录项目HTBIvc-01-P至HTBIvc-20-P，它们将为您提供条形码 1-20 的短读批量引物试剂。然后，您可以使用这 20 个试剂盒中的每一个来扩增前 20 个样本。在 arm-PCR 之后，可以将 20 个文库合并用于单个 HiSeq 泳道。相同的 20 个试剂盒可以再次用于第二个 HiSeq 泳道的接下来的 20 个样本，等等。目前，Illumina HiSeq 仪器可以在同一仪器运行中运行两个流动槽，总共 16 个泳道。因此，使用一个泳道的 20 个条形码，可以在一次 HiSeq 运行中对所有 200 个样本进行测序。

对于iRepertoire 的 dam-PCR 技术，条形码策略类似，只是 dam-PCR 必须作为服务执行或通过我们的自动化 iR-Flex 平台执行。当作为服务执行时，iRepertoire 的技术人员会处理条形码策略。对于也可用于 arm-PCR 的 iR-Flex 平台，每个自动化盒式磁带都有一个条形码。

有关 arm-PCR 和 damPCR 的更多信息，请参阅学习中心有关iRepertoire 的扩增技术的文章。

要探索我们的数据分析软件，请访问我们的生物信息学页面。

有关我们的 iR-Flex 平台的更多信息，请参阅我们的自动化页面。

关于测序深度/覆盖度的说明

由于测序覆盖率取决于每个样本的读取次数，并且每次测序运行都会产生一定数量的读取次数，因此多重样本将降低每个样本的覆盖率。因此，在规划多重测序项目时需要考虑测序深度。

汇集的样本数量取决于您的实验需求。例如，如果样本与疾病有关，并且您预计克隆扩增的数量只有几个，那么您可能能够在一个通道中汇集最多 60 个样本（取决于条形码的可用性），并且仍能实现您的目标。  

对于其他项目，您可能需要对单个样本进行更深入的测序。如果是这种情况，我们建议在 Illumina HiSeq 通道上用 10 个不同的条形码扩增同一样本，或在 Illumina MiSeq Flow Cell 上用 4 个不同的条形码扩增同一样本，并将它们视为不同的样本。 

有关测序覆盖率的更多信息，请参阅我们的学习中心关于选择读取深度的文章。